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紫外分光光度計(jì)測(cè)定葡萄糖的操作講解
發(fā)布日期：2017-05-15 瀏覽次數(shù)：9066
紫外分光光度計(jì)利用一定頻率的紫外可見(jiàn)光照射被分析的有機(jī)物質(zhì)，引起分子中價(jià)電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長(zhǎng)而變化的光譜，反映了試樣的特征。在紫外可見(jiàn)光的范圍內(nèi)，對(duì)于一個(gè)特定的波長(zhǎng)，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測(cè)量光譜可以進(jìn)行定性分析，而且根據(jù)吸收與已知濃度的標(biāo)樣的比較，還能進(jìn)行定量分析。
葡萄糖是自然界分布廣且為重要的一種單糖，它是一種多羥基醛。水溶液旋光向右，故亦稱“右旋糖”。葡萄糖在生物學(xué)領(lǐng)域具有重要地位，是活細(xì)胞的能量來(lái)源和新陳代謝中間產(chǎn)物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。在糖果制造業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。
紫外分光光度計(jì)如何快速測(cè)定葡萄糖呢？
一、材料、試劑：葡萄糖、糊精；葡萄糖氧化酶；草酸鈦鉀；麥芽糖；可溶性淀粉；0.9%氯化鈉注射液；所用試劑均為分析純；試驗(yàn)所用水為二次蒸餾水。
二、儀器與設(shè)備：紫外分光光度計(jì)；電子分析天平。
三、試驗(yàn)方法：
1、草酸鈦鉀溶液(0.0354 g/mL)的配制準(zhǔn)確稱取0.0354 g草酸鈦鉀分析純置于1000μL的生理鹽水中，充分溶解，備用。
2、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 g/mL)的配制準(zhǔn)確稱取0.1 g葡萄糖樣品置于1000μL的生理鹽水中，充分溶解，備用。
3、葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 U/250μL)的配制在裝有100 U/10μL葡萄糖氧化酶的離心管中，加入240μL的生理鹽水，混合均勻，備用。
4、樣品中葡萄糖的測(cè)定測(cè)試時(shí)，首先分別移取150μL葡萄糖氧化酶、75μL草酸鈦鉀、175μL緩沖溶液至2.5 mL的石英比色皿中，再移取100μL檢測(cè)試樣至比色皿中，立即置于紫外分光光度計(jì)中，測(cè)量其在波長(zhǎng)382 nm的吸光值，通過(guò)吸光值與葡萄糖質(zhì)量濃度間的響應(yīng)關(guān)系得知樣品中葡萄糖的含量。
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